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      1. 首頁 > 服務產品 > 測序送樣細則
        測序送樣細則

        樣品要求

        ①菌樣
        •需注明載體類型和抗性,我們常備Amp, Kan兩種抗生素,其他抗性自備;
        •應為高拷貝質粒,對于低拷貝質粒,請直接提供約3μg左右純化質粒;
        •需培養的菌液:要求提供的量至少500μl過夜培養的菌液,封口保存,防止交叉污染或滲漏;
        •若是特殊抗生素:請提供5ML菌液或質粒用于測序;
        •無需培養的菌液:要求提供的量至少為4ml已培養好的菌液;
        •大量樣品測序:建議在Eppendorf管中用牙簽穿刺培養;
        •注意:關于噬菌體,我們絕對不收菌液,只收抽提好的質粒,請一定要注意;

        ②質粒(除特殊樣品,我們一般不建議客戶提供質粒)
        •您自行抽提的質粒務必溶于20μl雙蒸水中,電泳檢測濃度大于100ng/μl濃度;
        •如有可能,同時提供1ml左右含有相應質粒的菌液備用;
        •若您要長期測序請您加大質粒的量,大質粒必需注明載體長度,拷貝數低也要注明;
        •必須寫明載體名稱,插入片段長度;

        ③PCR已純化
        •您自行純化的PCR產物務必溶于雙蒸水,濃度要求至少50ng/μl,量至少20μl以,濃度大于50ng/μl,并注明片段長度,長片段需適當增加量,便于核對樣品測序是否有問題,同時方便安排需要測通的樣品測序和拼接工作;
        •若您要長期測序請您加大PCR純化產物的量;
        •您回收的PCR產物務必為單一條帶,否則將無法測序或影響測序結果。

        ④PCR未純化
        •PCR未純化產物測序要求片斷長度大于100BP小于2KB,如大于2KB最好建議您克隆后測序,濃度要求至少50ng/μl,量至少50μl,并注明片段長度,便于核對樣品測序是否有問題,同時方便安排需要測通的樣品測序和拼接工作;
        •建議您送PCR未純化產物是電泳可見的單一明亮的特異性條帶;
        •核對所送樣品是否有滲漏現象,如有,建議您重新送樣。

        自備引物要求
        • 引物必須經過PAGE純化方可測序,濃度要求不低于5pmol/μl(或5μmol/L),體積大于10μl(干粉也可,務必標明OD值);
        •請提供引物全序列、PCR退火溫度,以供參考(引物長度18-22bp為宜),同時標明引物序列,以便幫助您更好地分析測序結果;
        •隨機引物、標記引物和簡并引物不能用于測序。
        樣品與引物的保存
        您提供的樣品及引物沒有特殊情況我們保留一個月,超過期限將全部處理。如果您要用超過一個月的樣品或引物測序請您重新提供樣品和引物。

        訂單填寫細則

        ①個人信息
        您測序訂單上登記的個人信息是您提供給我們的最原始資料,所有的測序工作都將依此訂單開展,所以務必詳細、準確、完整填寫。

        ②樣品信息
        •確保您樣品管上的編號和登記表上樣品編號一致,以免使您的樣品混淆。同時注意樣品編號不要超過8個字節,并不能出現漢字及特殊字符等(儀器不識別);
        •確認單個樣品反應數及樣品反應總數,以免出現多測或漏測現象,造成疑問或不必要的糾紛;
        •需要測通或單向測通的可以在表上注明,我們可以直接安排測通,節約您的測序時間。但注意:注明測通的我們將直接安排實驗,不再與您確認,所以有任何問題必須提前通知我們;
        •菌液和質粒測序一定要寫明正確載體名稱和引物名稱,以便我們正確測序和核對您的測序疑問。
        •如果是我處沒有的通用引物,請提供合適的引物測序。如您沒有引物也可以提供電子版的載體圖譜和序列(標明酶切位點和測序方向),我處可幫助設計引物后再安排測序。特別需要注意的是載體名稱一定寫全,以免用錯引物。
        如:只寫T載體,而PGEM-T和PMD18-T這兩種T載體的引物是不能共用。還有PMD18-T、PΜC18(118)、PΜC19(119)等系列載體測序引物不要寫正向(+,M13+,M13F)或反向(-,M13-,M13R),要注明M13F(-47)或M13R(-48),因為這類載體較特別。
        •菌液測序請注意抗生素(我們備氨芐青霉素,卡那霉素)和培養基類型(我們備LB),如是我處沒有的,請您提供5ML新鮮菌液或質粒測序;
        •有特殊結構的樣品(如:拷貝數低、GC rich、有poly結構、發夾結構、重復序列、復雜結構等)一定要在表上注明。這樣在安排實驗時我們可以有針對的改變實驗條件,提高這部分樣品的成功率。
         

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