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        DNA測序原理

        在分子生物學研究中,DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger(1977)發明的雙脫氧核糖核酸鏈末端終止法目前Sanger測序法得到了廣泛的應用。Sanger法是根據核苷酸在某一固定的點開始,隨機在某一個特定的堿基處終止,并且在每個堿基后面進行螢光標記,產生以A、T、C、G結束的四組不同長度的一系列核苷酸,然后再尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測,從而獲得可見的DNA堿基序列。Sanger法測序的原理就是,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)使之擴增,并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)使之終止。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止,終止點由反應中相應的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddntps的相對濃度可以調整,使反應得到一組長幾個至千以上個,相差一個堿基一系列片度。他們具有共同的起始點,但終止在不同的核苷酸上,可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段,凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標記進行檢測。

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